蔡司光学课 | 如何用激光共聚焦进行共定位研究

发布时间：2024-04-24 11:14
作者：AMEYA360
来源：蔡司
阅读量：1369

　　使用激光共聚焦进行共定位分析，为解决上述困扰提供了合适途径，在提供直观的图像结果同时，给出相应的数值化指标用以评估共定位程度，可以说激光共聚焦架起了视觉判断和定量分析的桥梁。

　　秘籍总结

　　• 高图像质量、高分辨率：高数值孔径成像物镜、扫描速度与平均策略是关键，Airyscan超高分辨模式同样提供Buff加成

　　• 避免串色：采用Best signal顺序采集是关键

　　• 避免过曝：打开Region Indicator小工具，直观有效判断过曝

　　• 光切厚度一致：Match Pinhole一键匹配所有通道的光切厚度

　　• 制备单一标记样本，并在不同样本成像时，Reuse 复用参数

　　• 数据分析：ZEN软件Colocal工具中“规定Threshold-选定分析ROI-比对共定位参数“三步走

　　案例分享

　　此案例所示是一个标记了线粒体内膜蛋白Tom20(绿色荧光)与线粒体外膜蛋白ATP5a(红色荧光)的Cos7细胞样本，在进行Airyscan超高分辨成像后，使用ZEN软件Colocal工具进行共定位分析：

蔡司光学课 | 如何用激光共聚焦进行共定位研究

　　在Colocal界面中，如下工具可以让你事半功倍：

蔡司光学课 | 如何用激光共聚焦进行共定位研究

　　• 形状工具：选定分析ROI，只有针对区域的共定位分析才是有意义的，在此案例中以细胞边界作为参考较为符合目的

　　• Threshold工具：分割信号与背景的关键

　　• 伪彩工具：一眼看出“共定位在哪里”，如上图中的洋红色区域

　　• 图表工具：展示或提取散点图、表格，共定位参数直观可查

蔡司光学课 | 如何用激光共聚焦进行共定位研究

　　最后，基于得到的Pearson系数、Manders系数等，进行共定位程度评估，为揭示蛋白之间的功能关联、mRNA的表达调控作用、药物在机体内的转归与代谢过程提供佐证。

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